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详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

发布时间: 2024-01-16 06:27

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详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

本法用带正电荷的聚氯乙烯微量反应板,将精子抗原吸附到聚氯乙烯固相载体表面,其固相抗原可与待测标本中抗精子抗体结合,并与加进的抗人IgG酶结合物起反应,形成抗原抗体酶结合物,终极在酶底物作用下而显色。

详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

包被液:0.01mol/LpH9.6碳酸钠缓冲液:

Na2CO31.06g

NaHCO30.84g}加双蒸水至1000mL。

缓冲液:0.01mol/LpH7.4PBS:

详解查精子抗体选酶联免疫吸附试验

精子抗原制备:筛选收集精液常规检查正常的精液,用生理盐水反复离心洗涤,尽可能除往精浆,经超声波超声粉碎,10~15min高速离心,吸上清,测定上清液蛋白浓度,将蛋白浓度稀释为3.5~5.0μg/mL,为精子抗原溶液。

反应板包被抗原:将人精子抗原稀释成3.5~5μg/mL,包被液加到聚氯乙烯微量测定板内,每孔100μL,置4℃冰箱过夜。

封闭处理:越日早晨,倾往抗原溶液,用洗涤PBS洗3次,每次5min,每次洗涤后都要将板在纸上拍干,再加进1%的聚乙烯醇溶液200μL封闭,置室温1h后同上法洗涤。

加待测样品:样品用PBS稀释100倍,每孔加进100μL,同时加As-Ab血清及正常童贞血清作分别阳性和阴性对照,置37℃温育1h,同上法洗涤。

加酶结合物:HRP-ProteinA以1∶640稀释,每孔加进100μL,置室温1h,同上洗涤。

酶反应:加新鲜配制的OPD底物溶液,每孔加进50μL,置室温暗处10min,再加10%H2SO4终止液每孔50μL。

结果判定:用酶标测定仪490μm测其OD值,OD值≥2.0时为阳性。

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